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延伸閱讀

SARS-CoV-2病毒

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SARs-CoV-2 感染如何導(dǎo)致多器官衰竭？

在 的嚴(yán)重病例中觀察到多個器官受損。據(jù)報道，腦部炎癥、癲癇發(fā)作和中風(fēng)以及嗅覺喪失。除了血凝塊形成外，SARS-CoV-2 還可能導(dǎo)致心臟病發(fā)作和心臟炎癥。肝臟和腎臟也顯示出嚴(yán)重?fù)p傷和衰竭的跡象。下胃腸道富含 ACE2 受體， 的癥狀可能包括腹瀉。盡管受 影響的器官系統(tǒng)清單越來越多，但仍有很多需要調(diào)查的地方。目前尚不清楚在這些器官系統(tǒng)中觀察到的損傷是由于直接的病毒損傷還是免疫系統(tǒng)過度活躍（細胞因子風(fēng)暴）、凝血異常或給藥副作用的間接影響。

補體系統(tǒng)如何促進 的發(fā)病機制？

補體途徑包括 30 多種蛋白質(zhì)，是先天免疫和宿主防御系統(tǒng)的重要組成部分。在病毒感染和細胞因子信號傳導(dǎo)引起內(nèi)皮損傷后，補體途徑的產(chǎn)物在肺泡-毛細血管界面處受到刺激。補體途徑激活組織因子表達以及血管性血友病因子 (VWF) 和血小板因子 V 的分泌，它們是凝血途徑的重要組成部分。已知補體途徑的過度激活會促進過度炎癥、內(nèi)皮細胞損傷、血栓形成、血栓形成傾向，并最終導(dǎo)致多器官系統(tǒng)衰竭。

對于補體系統(tǒng)如何導(dǎo)致在 中觀察到的凝血異常，有許多建議的解釋，例如 NET 形成、補體和凝血途徑之間的破壞性反饋回路。內(nèi)皮損傷、補體激活、中性粒細胞失調(diào)和高凝的綜合影響很可能共同加劇了 的嚴(yán)重程度。盡管有許多關(guān)于補體途徑、凝血級聯(lián)反應(yīng)和炎癥之間的串?dāng)_的假設(shè)，但在 發(fā)病機制領(lǐng)域，它們?nèi)绾螌?dǎo)致血栓形成尚不清楚。

細胞因子風(fēng)暴會引起哪些血管損傷？

細胞因子風(fēng)暴會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞損傷和細胞死亡。因此，發(fā)生了一些導(dǎo)致血栓形成和其他 并發(fā)癥的事件：

凝血和補體激活：補體系統(tǒng)在內(nèi)皮細胞損傷后被激活，從而觸發(fā)凝血級聯(lián)反應(yīng)。凝血途徑對于修復(fù)受損的血管組織和減少失血至關(guān)重要。然而，當(dāng)補體通路未得到適當(dāng)調(diào)節(jié)時，可能會出現(xiàn)高凝狀態(tài)，從而導(dǎo)致內(nèi)皮損傷并增加血栓形成的風(fēng)險。

毛細血管滲漏綜合征：當(dāng)血漿從毛細血管流入鄰近組織導(dǎo)致低血壓、水腫、器官損傷和急性呼吸衰竭時，就會發(fā)生毛細血管滲漏綜合征。

紅細胞吞噬作用：紅細胞吞噬作用是紅細胞的破壞，這可能導(dǎo)致貧血。這是由高水平的細胞因子介導(dǎo)的巨噬細胞活化引起的。

緊急粒細胞生成：全身細胞因子升高與低血小板數(shù)量和中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞的快速產(chǎn)生有關(guān)。這些粒細胞和單核細胞被迅速動員以遷移到炎癥和感染部位，以發(fā)揮防御作用。這也可能導(dǎo)致來自自然殺傷細胞和 T 細胞的促炎細胞因子的產(chǎn)生增加。

免疫血栓形成：中性粒細胞釋放中性粒細胞胞外陷阱 (NET) 以捕獲病原體并形成血栓，稱為免疫血栓形成。免疫血栓形成進一步放大細胞因子的產(chǎn)生，這可能導(dǎo)致廣泛的血栓形成。

彌散性血管內(nèi)凝血：血栓形成后可能會破壞血管系統(tǒng)止血，這可能會導(dǎo)致彌散性血管內(nèi)凝血 (DIC)。DIC 是血栓的形成，阻塞全身的小血管，可導(dǎo)致呼吸急促、低血壓、多器官衰竭和死亡。

在 研究期間如何使用血清學(xué) SARS-CoV-2 抗體測試？

SARS-CoV-2 抗體陽性結(jié)果表明個體已暴露于 SARS-CoV-2 并對其產(chǎn)生了免疫反應(yīng)。它并不表明存在活躍的 SARS-CoV-2 感染，而是表明已經(jīng)發(fā)生了接觸。追蹤 SARS-CoV-2 抗體水平對于人群研究至關(guān)重要，以識別病毒在人群中的傳播、抗體水平如何隨時間變化以及數(shù)據(jù)如何與免疫相關(guān)。血清學(xué)研究還將提供有關(guān) SARS-CoV-2 疫苗有效性的信息。疫苗的目標(biāo)是促進身體制造針對 SARS-CoV-2 病毒的抗體。能夠測量響應(yīng)疫苗遞送的抗體水平可能表明疫苗的功效。重要的是要記住，可以針對 SARS-CoV-2 病毒的不同抗原開發(fā)抗體，例如針對 S 蛋白或 N 蛋白。檢測不同的病毒蛋白將有助于確定免疫和病毒功能的機制。抗 SARS-CoV-2 抗體水平與 疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，這表明癥狀嚴(yán)重者的免疫反應(yīng)升高。

針對 SARS-CoV-2 的抗體是否賦予保護性免疫？

抗體通過在病毒侵入細胞之前中和或破壞血液或粘膜中的病毒來發(fā)揮作用。因此，測量血液中的抗體水平可以作為免疫保護的指標(biāo)。最近的研究表明，血液中針對 SARs-CoV-2 的抗體數(shù)量隨著時間的推移而迅速下降。目前尚不清楚抗體保護是否在水平低或無法檢測到時發(fā)生，或者針對 SARS-CoV-2 的抗體是否會提供防止再次感染的保護。需要更多的長期監(jiān)測和免疫學(xué)研究。

然而，T細胞免疫有望提供長期的免疫保護。T細胞通過靶向并殺死被病毒感染的細胞來發(fā)揮作用。暴露于病毒后記憶 T 細胞的形成將隨著時間的推移傳遞病毒特異性免疫反應(yīng)能力。需要更多的研究來調(diào)查對 SARS-CoV-2 的長期免疫反應(yīng)。

抗 SARS-CoV-2 抗體的免疫球蛋白類別之間有什么區(qū)別？

免疫球蛋白是由漿細胞產(chǎn)生的糖蛋白，對于抗體識別和結(jié)合抗原很重要。每個同種型具有不同的效應(yīng)子功能。SARS-CoV-2 特異性抗體主要存在于 IgM、IgA 和 IgG 免疫球蛋白類別中。

IgM 是在 SARS-CoV-2 感染后首先檢測到的主要反應(yīng)抗體。

IgA 分泌到呼吸道上皮和胃腸道的眼淚、粘液和唾液中。SARS-CoV-2 特異性 IgA 也可以在血清中進行血清轉(zhuǎn)化以進行檢測，并且在針對 SARS-CoV-2 呼吸道病原體的第一道防線中具有效應(yīng)子功能。IgA 也可以在早期階段用 IgM 檢測到，并且可能比 IgM 顯示出更高的診斷敏感性。

IgG 抗體在感染后較晚的時間段被檢測到，但在血清中保留的時間最長。

抗體反應(yīng)，尤其是 IgA，與 疾病進展的相關(guān)性是驚人的，需要進一步研究。

針對 SARS-CoV-2 的免疫抗體是如何產(chǎn)生的？

B 細胞是身體產(chǎn)生抗體的細胞，可提供體液免疫反應(yīng)。B 細胞通過與樹突和巨噬細胞免疫細胞接觸而遇到抗原。B 細胞在生發(fā)中心 (GC) 中形成，其中通過增殖發(fā)生克隆擴增，B 細胞進行類別轉(zhuǎn)換重組。免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換對于多樣化和增強細胞消除病原體的能力很重要。T 細胞細胞因子的激活誘導(dǎo) B 細胞進行克隆選擇，以富集具有最高抗原結(jié)合親和力的 B 細胞。這些選定的 B 細胞最終將分化為記憶 B 細胞和漿細胞，從而快速產(chǎn)生 SARs-CoV-2 特異性抗體。這些記憶 B 細胞和漿細胞有可能長壽并提供針對 SARS-CoV-2 病原體的持久保護，

細胞因子和趨化因子對抗體產(chǎn)生有何重要作用？

盡管形成細胞因子風(fēng)暴的名聲不好，但細胞因子在 B 細胞發(fā)育、存活、分化和增殖過程中具有重要的功能。B 細胞在對病毒入侵的免疫反應(yīng)過程中產(chǎn)生中和抗體。在感染期間，B 細胞被趨化因子干擾素募集到病原體。到達病毒后，B細胞受體以高親和力結(jié)合細胞膜上的抗原。進一步的 B 細胞刺激是由 T 輔助細胞釋放的細胞因子引起的。B 細胞還產(chǎn)生對適應(yīng)性免疫系統(tǒng)功能很重要的細胞因子。在 的背景下，細胞因子風(fēng)暴可能是危險的，但細胞因子在保護性免疫發(fā)展過程中也發(fā)揮著重要作用。

細胞因子風(fēng)暴與 的疾病嚴(yán)重程度有關(guān)嗎？

是的。細胞因子通常具有響應(yīng)病原體入侵的保護能力。然而，當(dāng)細胞因子水平升高并在全身快速循環(huán)時，保護功能就會喪失。有適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)機制來解決細胞因子免疫反應(yīng)。例如，細胞因子通常具有較短的半衰期，以抑制對局部感染部位的反應(yīng)。在高于閾值的水平上，這些監(jiān)管保護措施被克服，細胞因子變成病理性的，導(dǎo)致全身的附帶組織損傷。

細胞因子充當(dāng)炎癥指標(biāo)，也可能是 疾病進展的促成因素。細胞因子風(fēng)暴最初表現(xiàn)為持續(xù)發(fā)燒和全身癥狀（頭痛、疲勞等）。隨著病情的發(fā)展，可能會出現(xiàn)全身炎癥，表現(xiàn)為低血壓、高燒、血管舒張，并最終導(dǎo)致器官衰竭。引起急需關(guān)注的重要研究領(lǐng)域是圍繞驅(qū)動細胞因子風(fēng)暴的機制和風(fēng)險因素，以及如何在它們變得致命之前最好地進行治療。

什么是細胞因子風(fēng)暴？

循環(huán)細胞因子水平升高稱為細胞因子風(fēng)暴。細胞因子的作用是將中性粒細胞和單核細胞動員到炎癥部位以響應(yīng)病原體。細胞因子信號是一種快速反應(yīng)，通常在病原體和受感染細胞被清除后消失。在 SARS-CoV-2 的背景下，細胞因子 IL-12、IFN-a、MHC 1 類表達和 NK 細胞活化共同需要以抵抗病毒復(fù)制和* SARS-CoV-2 感染細胞。然而，這些信號通路也可能導(dǎo)致在細胞因子風(fēng)暴期間在錯誤的正反饋回路中快速產(chǎn)生促炎細胞因子和趨化因子。SARS-CoV-2 感染后被激活的促炎細胞因子的列表很廣泛，包括 IFN-a、IFN-g、IL-1、IL-6、IL-17、CXCL10、TNF-a 和 TGFb，和其他人一起。科學(xué)界已經(jīng)確定了細胞因子風(fēng)暴的關(guān)鍵參與者，但迫切需要更多關(guān)于它們?nèi)绾伟l(fā)展以及如何阻止它們的機制的研究。

SARS-CoV-2 感染期間如何觸發(fā)免疫系統(tǒng)？

對 SARS-CoV-2 的免疫反應(yīng)是通過細胞因子介導(dǎo)的。SARS-CoV-2 感染后促炎細胞因子 IP-10、MCP-1、MIP-1A 和 TNF-a 的釋放增加，這與 的嚴(yán)重程度和死亡率相關(guān)。抗原呈遞細胞 (APC)，例如樹突狀細胞和巨噬細胞，在 SARS-CoV-2 進入宿主細胞后被觸發(fā)。APC 通過模式識別受體識別病毒的結(jié)構(gòu)成分。這種識別會誘導(dǎo)信號級聯(lián)反應(yīng)以激活免疫效應(yīng)細胞，例如 B 細胞，并在初始防線中促進促炎蛋白 IFN-a、NF-kB、MAPK 和 TNF-b 的產(chǎn)生。這很重要，因為 IFN 刺激基因的表達具有抑制病毒復(fù)制的功能。然而，這種最初的免疫反應(yīng)是微妙的，因為促炎基因的過度表達會導(dǎo)致過度炎癥，從而引發(fā)急性呼吸窘迫綜合征，這在 中可能是致命的。盡管許多研究已經(jīng)梳理出對感染的免疫反應(yīng)機制，但并非每個人對病原體的反應(yīng)都相同。這在 中尤為明顯，其中存在多種免疫反應(yīng)，從無法檢測到可能致命的危險細胞因子風(fēng)暴。

SARS-CoV-2進入靶細胞后會發(fā)生什么？

在通過 ACE2 受體進入靶細胞后，SARS-CoV-2 將病毒遺傳物質(zhì)釋放到宿主細胞的細胞質(zhì)中。病毒遺傳物質(zhì)以 mRNA 的形式存在，可以翻譯成蛋白質(zhì)。核衣殼或 N 蛋白與病毒 mRNA 結(jié)合，起到將遺傳物質(zhì)定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體宿主機器的作用。非結(jié)構(gòu)蛋白被翻譯并形成復(fù)制酶-轉(zhuǎn)錄酶復(fù)合物，其功能是轉(zhuǎn)錄內(nèi)源性病毒遺傳物質(zhì)。輔助蛋白和結(jié)構(gòu)蛋白（例如 S 蛋白）的翻譯和組裝通過宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生，然后是內(nèi)質(zhì)網(wǎng) - 高爾基體中間區(qū)室 (ERGIC)。N 蛋白加入新復(fù)制的 mRNA 并一起進入 ERGIC 與其他結(jié)構(gòu)蛋白結(jié)合，最終形成新的 SARS-CoV-2 病毒。小囊泡通過胞吐作用將新形成的病毒從宿主細胞中排出。當(dāng)病毒離開宿主細胞時，建議細胞表面的蛋白酶引發(fā) S 蛋白，從而能夠有效攻擊其他細胞。SARS-CoV-2 病毒生命周期的復(fù)雜機制還有待進一步了解。

SARS-CoV-2 靶向哪些類型的細胞？

SARS-CoV-2 主要通過呼吸道和肺部的呼吸細胞進入人體。用于預(yù)測易受 SARS-CoV-2 感染的細胞類型的常用方法是分析進入相關(guān)基因的表達，例如 ACE2 和 TMPRSS2。ACE2 是 SARS-CoV-2 結(jié)合以進入靶細胞的受體，TMPRSS2 是 S 蛋白啟動所必需的。共表達 ACE2 和 TMPRSS2 的細胞包括肺泡 II 型上皮細胞、回腸腸細胞、鼻杯狀細胞以及食道和結(jié)腸細胞。有趣的是，ACE2 在整個氣道上皮中的表達水平較低，而在鼻分泌細胞中的表達水平最高。在氣道細胞中，TMPRSS2 在一小部分 ACE2+ 細胞中表達，這表明 SARS-CoV-2 可能正在利用額外的宿主蛋白酶。例如，SARS-CoV-2 可能使用溶酶體蛋白酶組織蛋白酶 B，它在 70-90% 的 ACE2+ 細胞中共表達。另一個需要更多研究的假設(shè)是 ACE2+ TMPRSS2+ 鼻杯狀細胞可能是感染的初始位置，并具有作為病毒庫的雙重功能。需要更多的研究來確定被 SARS-CoV-2 直接感染的細胞類型。

SARS-CoV-2如何進入人體？

了解 SARS-CoV-2 如何感染細胞是了解其致病性的關(guān)鍵一步。SARS-CoV-2 在宿主蛋白酶激活劑的幫助下通過 ACE2 細胞表面受體進入細胞。來自SARS-CoV-2的刺突蛋白（S蛋白）通過受體結(jié)合域（RBD）與宿主細胞上的ACE2以高親和力結(jié)合。宿主蛋白酶，如 TMPRSS2、弗林蛋白酶和溶酶體蛋白酶，需要通過蛋白水解激活病毒 S 蛋白。有人提出蛋白酶激活賦予 S 蛋白結(jié)構(gòu)變化，增強 RBD 與 ACE2 的結(jié)合并促進膜融合。宿主蛋白酶如何促進 SARS-CoV-2 結(jié)合和進入細胞的功能機制需要進一步研究。

SARS-CoV-2 是如何傳播的？

根據(jù)世界衛(wèi)生組織的說法，SARS-CoV-2 的傳播是通過與受感染攜帶者的呼吸道飛沫和唾液分泌物密切接觸而發(fā)生的。SARS-CoV-2 的傳播甚至可以在產(chǎn)生氣溶膠的醫(yī)療程序中通過空氣傳播。但是，尚不清楚 SARS-CoV-2 在非氣溶膠生成過程中是否通過氣溶膠途徑傳播。受污染的表面可能含有活的 SARS-CoV-2 病毒，盡管沒有一致的證據(jù)表明 SARS-CoV-2 可以在接觸受污染的表面后傳播。已在糞便、尿液、血漿和血清中檢測到 SARS-CoV-2 RNA，但尚不清楚病毒是否可以通過這些途徑傳播。SARS-CoV-2感染的傳播和隨后的傳播還有更多的待了解。

是否有可用的超靈敏鱸魚 ELISA？如果需要在粘液中檢測較低的 VTG 值，是否有任何修改鱸魚 ELISA 的建議？

該TECO®鱸魚卵黃蛋白原ELISA是鱸魚/鱸形目市面上ELISA。目前，對超敏感協(xié)議的需求不足。使用當(dāng)前協(xié)議的一種選擇是將稀釋系數(shù)從 1:10（50μL 樣品 + 450μL 提取緩沖液）降低到 1:6（50μL 樣品 + 250μL 提取緩沖液）。在開發(fā)過程中，這已被證明可以適當(dāng)提高檢測的靈敏度。

當(dāng)我收集樣本時，我如何知道粘液樣本沒有被附近的魚交叉污染？

如果擔(dān)心附近魚的交叉污染，建議擦拭鰓下的粘液。這可能是網(wǎng)捕的一個問題，因為高水平和低水平的卵黃蛋白魚彼此靠近。

我怎么知道粘液樣本沒有與可能干擾檢測并影響我的結(jié)果的其他環(huán)境物質(zhì)交叉污染？

檢測中使用的抗體非常特異，不能識別其他成分。此外，用于稀釋用拭子收集的粘液的提取緩沖液（500μL）具有稀釋效果，可以稀釋環(huán)境污染物的罕見情況。在該檢測的開發(fā)過程中，使用水族箱水作為陰性對照，與水族箱水相比，未檢測到來自粘液樣本的污染。

是否有必要單獨針對蛋白質(zhì)校正粘液（或血液，WBH）VTG？

雖然這不是必需的，但用于收集粘液的提取緩沖液和用于稀釋血液和 WBH 的稀釋緩沖液不含蛋白質(zhì)，因此它們確實允許輕松平行測定蛋白質(zhì)。

什么是校準(zhǔn)器材料？

校準(zhǔn)品材料是生物的而非重組的。它由經(jīng)過柱子并通過親和層析分離的血清制備。使用免疫組織化學(xué)染色、蛋白質(zhì)印跡和 SDS PAGE 技術(shù)對其進行了廣泛的驗證和表征。

基質(zhì)溶液的成分是什么？它在分析中的目的是什么？

確切的組成是專有信息。該溶液負(fù)責(zé)激活板的*反應(yīng)性。

粘液提取緩沖液和樣品稀釋緩沖液的組成是什么？

確切的成分是專有信息，但兩者都是針對分析優(yōu)化的無蛋白質(zhì)溶液。

試紙有什么涂層？

卵黃蛋白原的多克隆（親和純化）抗體。

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