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什么是解凍血清的最佳方法?
血清在 2-8°C 下解凍以防止降解;或者,它可以在室溫下解凍并定期攪拌以重新懸浮內容物。
解凍的血清在加入細胞培養基之前應充分混合。
高于 37°C 的溫度會加速關鍵血清因子的降解,從而影響血清性能,在實驗室中應避免。
血清中的沉淀物是什么?
解凍或長時間冷凍和/或冷藏后可能會出現混濁和絮狀物質。我們的經驗表明,這些修飾不會影響血清的生物學性能。
一些沉淀是由纖維蛋白引起的:
我們的采集程序和快速冷凍可能會在血清中留下一些纖維蛋白原。纖維蛋白原是凝塊形成蛋白纖維蛋白的可溶性前體。纖維蛋白可能在解凍或熱滅活后出現。纖維蛋白不會改變血清促進細胞生長的能力。建議使用未經處理(過濾或離心)的血清。
一些沉淀是由磷酸鈣引起的:
在 37°C 下長時間孵育的血清會變得混濁并可能出現沉積物。它們由鈣和磷組成。據我們所知,這不會改變細胞培養物中血清的性能。
血清需要加熱滅活嗎?
對于大多數細胞培養應用,不推薦熱滅活血清。熱滅活會降解補體蛋白,這可能會干擾免疫分析。長時間加熱血清會減少或破壞生長因子,并增加沉積物的形成,這些沉積物通常被誤認為是微生物污染。
血清應該如何熱滅活?
首先在 2-8°C 下解凍血清和對照血清瓶。
攪拌瓶裝血清,避免解凍過程中形成沉淀物,然后將其放入調至80°C的水浴中。
一旦控制瓶溫度達到50°C,將恒溫槽調至70°C;當瓶子溫度達到 55°C 時,將恒溫器更改為 60°C。
當血清達到 56°C 的溫度時,使用計時器(30 分鐘是注冊時間)并將水浴的恒溫器更改為 56°C。在這 30 分鐘內,定期檢查溫度并通過調節恒溫器、添加一些冷水以及是否降低蓋子來保持溫度穩定。每 5 到 10 分鐘攪拌一次血清。
將血清在室溫下保持 30 分鐘,然后將血清冷凍在 -20°C。
注:
。攪拌對于良好的血清質量至關重要。如果血清沒有正確混合,會出現鹽、蛋白質和脂質的沉淀物,并形成結晶和絮凝沉積物。這些沉積物對細胞培養無毒,但會影響血清外觀和稠度。
. 長時間加熱血清會破壞生長促進劑,這也會導致沉積物形成。
血清在 +2 至 +8°C 之間可以儲存多長時間?
血清可在 +2 至 +8°C 之間儲存長達 8 周而不會降低其性能 (*)。
Biowest 的內部研究表明,在 26 周的儲存期間(+2 至 +8°C),血清促進細胞生長的能力沒有顯著改變。
(*) Art to Science,第 19 卷,第 2 期,“冷藏溫度 (2-8°C) 下的血清穩定性"。
血清的推薦儲存溫度是多少?
血清應冷凍保存并避光。推薦的存儲溫度為 -10°C 至 -40°C。在低于 -40°C 的溫度下,瓶子可能會變脆,增加破裂的風險。
胰蛋白酶產品的顏色并不總是相同是否正常?
一些胰蛋白酶制劑含有酚紅。由于產品與干冰一起運輸,因此 包裝中可能會積聚大量 CO 2。這種 CO 2 可能會進入溶液并稍微降低 pH 值,呈現橙色(pH 值 6.5 左右)與粉紅色(pH 值 7.3 左右)的顏色。該溶液,如果橙色(酸性)仍然可以按原樣使用,或者可以添加氫氧化鈉來調節 pH 值。
四環素對 FBS 在細胞生物學中的意義
四環素是一類廣譜抗生素,通過阻斷氨酰基-tRNA 與核糖體的結合來抑制細菌蛋白質合成。由于對抗生素抗性微生物發展的日益關注,歐盟在 1970 年代初期禁止使用四環素作為生長促進劑。然而,在世界其他地方,四環素仍然是家畜常用的抗生素之一。自 1992 年以來,四環素控制的轉錄激活系統,或通常稱為“Tet-Off"和“Tet-On"系統,已被用于在全球實驗室使用的細胞系模型中誘導哺乳動物表達。在 Tet-Off 系統中,如果存在四環素,則基因表達會被沉默,并且通過從培養基中去除四環素來誘導表達。反之亦然,
兩種系統對 FBS 中發現的甚至少量四環素都非常敏感。因此,如果研究人員使用這些工具來控制他的細胞培養模型中的基因表達,那么供應*不含四環素的 FBS 就非常重要。
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為什么只選擇AB血型?
來自 AB 型供體的人血清缺乏針對 A 和 B 血型抗原的抗體。因此,它最大限度地減少了免疫反應性,因為大多數人類血清使用者都在處理來自免疫系統的細胞。
為什么人類血清只存在于男性供體中?
懷孕的婦女可能會產生針對父親細胞和/或胎兒細胞上攜帶的主要組織相容性類 (MHC) 抗原的抗體。男性捐贈者不存在此類風險。
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